Diferența dintre microscopul cu fluorescență și microscopul confocal laser
microscop fluorescent
1. Microscopul cu fluorescență folosește ca sursă de lumină lumina ultravioletă, care este folosită pentru a iradia obiectul detectat pentru a-l face să emită fluorescență și apoi să observe forma și poziția obiectului la microscop. Microscopul cu fluorescență este folosit pentru a studia absorbția, transportul, distribuția și localizarea substanțelor chimice în celule. Unele substanțe din celule, cum ar fi clorofila, pot avea fluorescență după ce au fost iradiate de razele ultraviolete; Alte substanțe nu pot fluoresce de la sine, dar pot fluoresce după ce au fost vopsite cu coloranți fluorescenți sau anticorpi fluorescenți și iradiate cu raze ultraviolete. Microscopul cu fluorescență este unul dintre instrumentele cercetării calitative și cantitative asupra acestor substanțe.
2, principiul microscopului cu fluorescență:
(a) Sursă de lumină: sursa de lumină radiază lumină de diferite lungimi de undă (de la ultraviolet la infraroșu).
(b) Sursă de lumină cu filtru de excitare: transmite lumină cu o lungime de undă specifică care poate face ca proba să fluoresce, în timp ce blochează lumina care este inutilă pentru fluorescența de excitație.
(c) Specimenele fluorescente: în general colorate cu pigmenți fluorescenți.
(d) Filtru de blocare: blocarea luminii de excitație care nu este absorbită de eșantion pentru a transmite selectiv fluorescența, iar unele lungimi de undă din fluorescență sunt, de asemenea, transmise selectiv. Un microscop care folosește lumina ultravioletă ca sursă de lumină pentru a face obiectul iradiat să emită fluorescență. Microscopul electronic a fost asamblat pentru prima dată de Knohl și Ha Roska la Berlin în 1931. Acest microscop folosește un fascicul de electroni de mare viteză în loc de un fascicul de lumină. Deoarece lungimea de undă a fluxului de electroni este mult mai mică decât cea a undei luminoase, mărirea microscopului electronic poate ajunge la 800 mii de ori, iar limita minimă de rezoluție este de 0,2 nanometri. Microscopul electronic cu scanare, care a început să fie folosit în 1963, îi poate face pe oameni să vadă structurile minuscule de pe suprafața obiectelor.
3. Domeniul de aplicare: folosit pentru a mări imaginea obiectelor minuscule. Se aplică în general la observarea biologiei, medicinei și particulelor microscopice.
Microscop confocal
1. Microscopul confocal adaugă pe calea optică a luminii reflectate o semi-lentilă semi-reflectorizantă, care refractă lumina reflectată care a trecut prin lentilă în alte direcții. La focar, există o deflectoare cu un orificiu, iar orificiul este situat la focalizare. În spatele deflectorului este un tub fotomultiplicator. Se poate imagina că lumina reflectată înainte și după focalizarea luminii de detectare trece prin acest sistem confocal și nu va fi focalizată pe gaura mică, ci va fi blocată de deflector. Deci fotometrul măsoară intensitatea luminii reflectate la focalizare.
2. Principiu: Microscopul optic tradițional folosește sursa de lumină de câmp, iar imaginea fiecărui punct de pe specimen va fi interferată de difracția sau lumina împrăștiată a punctelor adiacente; Microscopul confocal cu scanare laser scanează fiecare punct al planului focal din eșantion folosind sursa de lumină punctuală formată de fasciculul laser care trece prin orificiul de iluminare. Punctul iradiat de pe eșantion este fotografiat la orificiul de detectare, care este recepționat punct cu punct sau linie cu punct de tubul fotomultiplicator (PMT) sau dispozitivul cuplat la rece (cCCD) după detectarea orificiului, iar o imagine fluorescentă se formează rapid pe ecranul monitorului computerului. Orificiul de iluminare și orificiul de detectare sunt conjugate în raport cu planul focal al lentilei obiectiv, iar punctele de pe planul focal se concentrează pe orificiul de iluminare și pe orificiul de emisie în același timp, iar punctele din afara planului focal nu vor să fie fotografiată la orificiul de detectare, astfel încât imaginea confocală obținută să fie secțiunea transversală optică a specimenului, care depășește defectul de imagine neclară al microscopului comun.
3. Domenii de aplicare: care implică medicină, cercetare pe animale și plante, biochimie, bacteriologie, biologie celulară, țesuturi și embrioni, știința alimentelor, genetică, farmacologie, fiziologie, optică, patologie, botanică, neuroștiință, biologie marine, știința materialelor, știința electronică, mecanică, geologie petrolieră și mineralogie.
