Determinarea numărului de microorganisme-Metoda de numărare directă microscopică!
Creșterea populației bacteriene se manifestă printr-o creștere a numărului de celule sau o creștere a materialului celular. Metodele de determinare a numărului de celule includ numărarea microscopică directă, numărul de plăci, estimarea turbidității prin spectrofotometru, numărul cel mai probabil MPN și filtrarea pe membrană. (filtrare pe membrană) etc. Metodele de măsurare a substanțelor celulare includ determinarea greutății celulare uscate, determinarea anumitor componente celulare, cum ar fi conținutul de azot, conținutul de ARN și ADN și determinarea produșilor metaboliți. Pe scurt, există multe metode de măsurare a creșterii microbiene, fiecare cu propriile avantaje și dezavantaje. Metoda trebuie selectată în funcție de cerințele specifice ale lucrării. Acest experiment introduce în principal metoda de numărare directă cu microscop, care este utilizată în mod obișnuit în producția și activitatea de cercetare științifică.
1. Cerințe privind scopul
1. Clarificați principiul numărării cu o placă de numărare a celulelor sanguine.
2. Stăpânește metoda de numărare a microorganismelor folosind o tablă de numărare a celulelor sanguine.
2. Principii de bază
Metoda de numărare directă la microscop este o metodă simplă, rapidă și intuitivă care plasează o cantitate mică de suspensie a probei de testat pe o lamă specială cu o zonă și volum determinate (numită și bacteriometru) și o numără direct la microscop. Metode. În prezent, bacteriometrele utilizate în mod obișnuit în țară și în străinătate includ: hemocitometru, bacteriometru Peteroff-Hauser și bacteriometru Hawksley, etc. Toate pot fi folosite pentru a număra drojdiile, bacteriile, sporii de mucegai și alte suspensii, iar principiile de bază sunt aceleași. Ultimele două contoare bacteriene au un volum total de 0.02 mm3 după ce au fost acoperite cu un capac de sticlă, iar distanța dintre capacul de sticlă și lamă este de numai 0,02 mm. Prin urmare, o lentilă obiectiv cu imersie în ulei poate fi folosită pentru a observa și detecta celule mai mici, cum ar fi bacteriile. numara. Pe lângă utilizarea acestor bacteriometre, există și o metodă de estimare care observă direct raportul dintre zona frotiului și zona câmpului vizual la microscop. Această metodă este utilizată în general pentru examinarea bacteriologică a laptelui. Avantajele metodei de numărare directă cu microscop sunt că este intuitivă, rapidă și ușor de utilizat. Cu toate acestea, dezavantajul acestei metode este că rezultatul măsurat este de obicei suma bacteriilor moarte și a bacteriilor vii. Există în prezent câteva metode pentru a depăși acest neajuns, cum ar fi combinarea culturii microcamerale de colorare a bacteriilor viabile (timp scurt) și adăugarea de inhibitori ai diviziunii celulare pentru a atinge scopul de a număra numai bacteriile viabile.
Acest experiment folosește un hemocitometru ca exemplu pentru a efectua numărarea directă la microscop. Pentru utilizarea celorlalte două bacteriometre, vă rugăm să consultați instrucțiunile fiecărui producător. Numărarea directă la microscop folosind un hemocitometru este o metodă de enumerare a microbilor folosită în mod obișnuit. Tabla de numărare este un tobogan special cu patru caneluri care formează trei platforme; platforma mai lată din mijloc este împărțită în două jumătăți printr-o canelură orizontală scurtă și există o grilă pe fiecare parte a platformei. Fiecare grilă pătrată este împărțită în nouă pătrate mari, iar pătratul mare din mijloc este camera de numărare. Structura tablei de numărare a celulelor sanguine este prezentată în figura {{0}}. Există, în general, două specificații pentru scara camerei de numărare. Unul este un pătrat mare împărțit în 25 de pătrate medii, iar fiecare pătrat mediu este împărțit în 16 pătrate mici (Figura 15-2); celălalt este un pătrat mare. Grila pătrată este împărțită în 16 pătrate medii, iar fiecare pătrat mediu este împărțit în 25 de pătrate mici. Cu toate acestea, indiferent de ce fel de tablă de numărare este, există 400 pătrate mici în fiecare pătrat mare. Lungimea laturii fiecărui pătrat mare este lmm, apoi aria fiecărui pătrat mare este lmm2. După acoperirea lamului de acoperire, înălțimea dintre lamelă și lamă este de 0,lmm, deci volumul camerei de numărare este de 0,lmm3 (o zece miimi de mililitru). Figura 15-1 Structura panoului de numărare a celulelor sanguine (1) Figura 15-2 Structura panoului de numărare a celulelor sanguine (2) A. Vedere frontală; B. Sectiune longitudinala; grilă pătrată mărită, pătratul mare din mijloc este camera de numărare 1. Table de numărare a celulelor sanguine; 2. Lama de acoperire; 3. Când numărați în camera de numărare, de obicei numărați numărul total de bacterii în cinci pătrate, apoi găsiți valoarea medie a fiecărui pătrat și apoi înmulțiți cu 25 sau 16 pentru a obține Numărul total de bacterii dintr-un pătrat mare este apoi convertit în numărul total de bacterii din 1 ml de soluție bacteriană. Să presupunem că numărul total de bacterii din cele cinci pătrate din mijloc este A, iar factorul de diluție al soluției bacteriene este B. Dacă este o placă de numărare cu 25 de pătrate din mijloc, atunci numărul total de bacterii din 1 ml de soluție bacteriană {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (bucăți) În același mod, dacă este o placă de numărare cu 16 pătrate, numărul total de bacterii din 1 ml de soluție bacteriană {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (bucăți),,
