Determinarea populatiei microbiene - metoda de numarare microscopica directa!
I. Cerințe privind scopul
1, Pentru a clarifica principiul numărării plăcilor de hematocrit.
2, Stăpânește metoda de numărare microbiană folosind placa de hematocrit.
II. Principii de baza
Metoda de numărare directă la microscop este o cantitate mică de suspensie a probei care urmează să fie testată pe o lamă specială cu o zonă și un volum definite (cunoscută și sub denumirea de contor bacteriologic), numărând direct la microscop o metodă simplă, rapidă, intuitivă. În prezent, contoarele bacteriologice interne și străine utilizate în mod obișnuit sunt: placă de numărare a celulelor sanguine, contoare bacteriologice Peteroff-Hauser și contoare bacteriologice Hawksley, etc., care pot fi utilizate pentru drojdii, bacterii, spori de mucegai și alte suspensii de numărare, principiul de bază e aceeasi. Ultimele două tipuri de contoare au un volum total de 0.02 mm3 după ce este pus lama, iar distanța dintre lamelă și felia de suport este de numai 0,02 mm, deci celule mai mici, cum ar fi bacteriile pot fi observate și numărate cu un obiectiv de imersie în ulei. Pe lângă utilizarea acestor contoare, există și o metodă de estimare a raportului dintre suprafața frotiului și zona câmpului vizual observată direct la microscop, care este utilizată în general pentru examinarea bacteriologică a laptelui de vacă. Avantajele metodei de numărare directă cu microscop sunt intuitive, rapide și ușor de utilizat. Cu toate acestea, dezavantajul acestei metode este că rezultatul este de obicei suma organismelor moarte și vii. Există câteva metode pentru a depăși acest dezavantaj, cum ar fi combinația de culturi microcamerale colorate cu bacterii vii (timp scurt) și adăugarea de inhibitori ai citokinezei pentru a atinge scopul de a număra doar organisme vii.
Etapele operației
1, Prepararea suspensiei bacteriene
Utilizați soluție salină sterilă pentru a face suspensie bacteriană de drojdie de bere cu concentrația adecvată.
2, Camera de numărare a oglinzilor
Înainte de adăugarea probelor, camera de numărare a plăcii de numărare trebuie inspectată mai întâi. Dacă există murdărie, aceasta trebuie curățată și uscată înainte de numărare.
3, Adăugarea de mostre
Curățați și uscați placa de numărare a celulelor sanguine acoperită cu o lametă și apoi utilizați o biuretă capilară sterilă pentru a agita suspensia de drojdie de bere de pe marginea lamei pentru a scăpa o picătură mică, astfel încât lichidul bacterian de-a lungul golului prin penetrare capilară în camera de numărare automată, în general, camera de numărare poate fi umplută cu lichid bacterian. La prelevarea probelor, soluția bacteriană trebuie agitată bine mai întâi; la adăugarea probelor, camera de numărare nu trebuie să aibă bule de aer.
4, numărarea microscopului
După adăugarea probei, lăsați-o să se odihnească timp de 5 minute, apoi puneți placa de numărare a celulelor sanguine pe suportul microscopului, găsiți mai întâi locația camerei de numărare cu mărire scăzută, apoi schimbați-o la mărire mare pentru numărare. Reglați intensitatea luminii microscopului în mod corespunzător, pentru microscopul cu o lumină reflector ar trebui să acorde, de asemenea, atenție la lumina nu ar trebui să fie părtinitoare într-o parte, altfel câmpul vizual nu este ușor de limbă linia de grilă a camerei de numărare clară, sau vezi doar linia verticală sau doar linia orizontală. Dacă lichidul bacterian este prea gros sau prea subțire înainte de numărare, este necesar să se reajusteze diluția înainte de numărare. Cerințele generale de diluare a probei de aproximativ 5 până la 10 bacterii în fiecare celulă sunt adecvate. Pentru fiecare cameră de numărare, organismele din 5 compartimente din mijloc (4 colțuri și un compartiment din mijloc în centru) sunt selectate pentru numărare. Organismele situate pe liniile grilei sunt de obicei numărate doar pe liniile superioare și din dreapta. În cazul înmuguririi drojdiei, atunci când corpul înmugurit atinge jumătate din dimensiunea celulei mamă, acesta este socotit ca două organisme. Numărarea unei probe din cele două camere de numărare în valoare medie pentru a calcula conținutul bacterian al probei.
5. Curățarea plăcii de hematocrit
După utilizare, clătiți placa de numărare a celulelor sanguine cu apă sub robinet, nu folosiți obiecte dure pentru spălat și periaj, uscați-o singur sau folosiți un uscător de păr pentru a o usca după spălare. Inspectați microscopic placa pentru a vedea dacă există organisme reziduale sau alte precipitate în fiecare compartiment. Daca nu este curata, spalarea trebuie repetata pana este curata.
