Metode și pași de depanare pentru microscopia cu contrast de fază
o. Pe baza ajustării sistemului de iluminare Kuhler, utilizați metoda câmpului luminos pentru a focaliza în mod clar proba;
b. Rotiți reflectorul la Ph1 și aliniați-l cu linia scalei de pe placa turnantă. Selectați un obiectiv de contrast de fază de 10 x și înlocuiți-l cu proba transparentă care trebuie observată;
c. Scoateți unul dintre oculare, înlocuiți-l cu un telescop de centrare și focalizați pe cele două inele de contrast din câmpul vizual (inelul de contrast negru al lentilei obiectiv și inelul de contrast de transmisie al lentilei condensatorului);
d. Cele două inele de diferență din câmpul vizual s-ar putea să nu coincidă neapărat. Reglați cele două dispozitive de reglare pe reflector (reglarea pozițiilor stânga și dreapta ale inelelor de diferență cu tije de reglare și butoane tip fricțiune pentru reglarea pozițiilor față și spate), astfel încât inelul transparent să se miște înainte și înapoi pentru a coincide cu inelul negru ;
e. După ajustare, treceți înapoi la ocularul de observare și apăsați filtrul verde pe calea optică pentru a observa imaginea diferenței de fază a probei;
f. Când se observă cu obiective de 20 x și 40 x, reflectorul trebuie setat în poziția Ph2, iar când se folosește un obiectiv de 100 x, reflectorul trebuie setat în poziția Ph3.
Domeniul de aplicare: Potrivit pentru observarea probelor transparente, necolorate sau necolorate, cum ar fi diferite celule, țesuturi vii, felii de țesut necolorate sau necolorate, organisme acvatice etc.
Principiul de bază al microscopului cu contrast de fază
Când lumina trece printr-un specimen relativ transparent, nu există nicio modificare semnificativă a lungimii de undă (culoarea) și a amplitudinii (luminozitatea) luminii. Prin urmare, atunci când se observă specimene necolorate (cum ar fi celulele vii) sub un microscop optic obișnuit, morfologia și structura lor internă sunt adesea dificil de distins. Cu toate acestea, datorită diferențelor de indice de refracție și grosime a diferitelor părți ale celulei, vor exista diferențe în calea optică a luminii directe și difractate la trecerea prin acest specimen. Pe măsură ce calea optică crește sau scade, faza undelor luminoase accelerate sau întârziate se va schimba (rezultând diferența de fază). Diferența de fază a luminii nu poate fi simțită cu ochiul liber, dar microscopul cu diferență de fază poate folosi dispozitivul său special - o deschidere circulară și o placă de fază și poate folosi fenomenul de interferență al luminii pentru a transforma diferența de fază a luminii într-o diferență de amplitudine. (diferență de lumină și întuneric) care poate fi detectată de ochiul uman. Acest lucru face ca obiectul inițial transparent să prezinte diferențe evidente de lumină și întuneric, îmbunătățește contrastul și ne permite să observăm în mod clar celulele vii și anumite structuri fine din interiorul celulelor care nu pot fi văzute sau văzute clar la microscoape optice obișnuite și microscoape cu câmp întunecat.
Principiul imagistic al unui microscop cu contrast de fază: sursa optică poate trece doar printr-un inel transparent al unei deschideri circulare, care este apoi focalizat într-un fascicul de lumină. Când acest fascicul de lumină trece prin obiectul testat, suferă diferite grade de abatere (difracție) din cauza căilor optice diferite ale fiecărei părți. Datorită faptului că imaginea formată de inelul transparent coincide cu suprafața conjugată de pe placa de fază și cu planul focal din spatele obiectivului. Prin urmare, lumina directă care nu a deviat trece prin suprafața conjugată, în timp ce lumina difractată care a deviat trece prin suprafața de compensare. Datorită proprietăților diferite ale suprafeței conjugate și ale suprafeței de compensare pe placa de fază, acestea vor genera o anumită diferență de fază și, respectiv, reducerea intensității luminii care trece prin aceste două părți. Cele două seturi de lumină vor converge apoi prin lentila din spate și vor călători pe aceeași cale optică, provocând interferențe între lumina directă și difractată, schimbând diferența de fază în diferență de amplitudine. În acest fel, în timpul microscopiei cu contrast de fază, diferența de fază care nu poate fi distinsă de ochiul uman este transformată într-o diferență de amplitudine (diferență de luminozitate) care poate fi distinsă de ochiul uman prin lumina unui corp transparent incolor.
