Comparație între microscopul confocal și microscopul optic obișnuit
Microscopul este principalul instrument de observare a celulelor. În funcție de sursa de lumină, aceasta poate fi împărțită în două categorii: microscop optic și microscop electronic. Primul folosește lumina vizibilă (de la microscopul ultraviolet la lumina ultravioletă) ca sursă de lumină, în timp ce al doilea folosește un fascicul de electroni ca sursă de lumină. Microscopul optic obișnuit și microscopul confocal laser aparțin aceluiași microscop optic.
I. Microscop optic general
Microscopul biologic obișnuit este format din trei părți, și anume: ① sistem de iluminare, inclusiv sursa de lumină și condensator; ② Sistemul de mărire optică, format din obiective și oculare, este corpul principal al microscopului, pentru a elimina aberația sferică și aberația cromatică, ocularele și obiectivele sunt compuse dintr-un grup complex de lentile; ③ dispozitiv mecanic, utilizat pentru a fixa materialul și observarea confortului.
Obiectul microscopului este clar nu numai determinat de mărire, ci și de puterea de rezoluție a microscopului (rezoluție), puterea de rezoluție se referă la microscop (sau ochiul uman de la ținta 25 cm) poate distinge obiectul zui intervale mici de capacitatea de a distingerea mărimii puterii de rezoluție este determinată de lungimea de undă a luminii și rata gurii oglinzii și indicele de refracție al mediului, exprimat în formula:
R=0.61λ /NANA=nsin /2 unde: n=indicele de refracție al mediului;=unghiul gurii oglinzii (specimenul de pe gura obiectivului unghiului de tensiune), NA=rata gurii oglinzii (apertura numerică). Unghiul gurii oglinzii trebuie să fie întotdeauna mai mic de 180?, deci valoarea zui a lui sina/2 este neapărat mai mică de 1.
Indicele de refracție al sticlei utilizat în producția de lentile optice este de 1,65 ~ 1,78, indicele de refracție al mediului utilizat cu cât este mai aproape de sticlă, cu atât mai bine. Pentru obiectivul uscat, mediul pentru aer, viteza gurii oglinzii este în general 0.05 ~ 0,95; lentile de ulei cu ulei de cedru ca mediu, rata gurii oglinzii poate fi aproape de 1,5.
Lungimea de undă obișnuită a luminii de 400~700nm, astfel încât valoarea puterii de rezolvare a microscopului nu va fi mai mică de 0,2μm, puterea de rezoluție a ochiului uman este de 0,2mm, astfel încât designul general al microscopului zui de mărire este de obicei 1000X.
În al doilea rând, microscopul de scanare confocal laser
Microscop cu scanare confocal cu laser (microscop cu scanare confocal cu laser), cu un laser ca sursă de lumină de scanare, punct cu punct, linie cu linie, suprafață cu suprafață Imagini de scanare rapidă, laser de scanare și colecție de fluorescență a unui obiectiv comun, punct de focalizare cu laser de scanare obiectiv , dar și imagistica instantanee a punctului obiect. Datorită lungimii de undă mai scurte a fasciculului laser, fasciculul este foarte fin, astfel încât microscopul de scanare laser confocal are o rezoluție înaltă, de aproximativ 3 ori mai mare decât a unui microscop optic obișnuit. Sistemul este focalizat o singură dată și scanarea este limitată la un singur plan al probei. Când adâncimea de focalizare nu este aceeași, pot fi obținute imagini cu diferite niveluri de adâncime ale probei, iar aceste informații despre imagine sunt stocate în computer, prin analiză și simulare pe computer, poate arăta structura tridimensională a probei de celule .
