Comparație între microscopia confocală și microscopia optică convențională
Microscopul este principalul instrument de observare a celulelor. În funcție de diferite surse de lumină, acesta poate fi împărțit în două categorii: microscoape optice și microscoape electronice. Primul folosește lumina vizibilă (microscopul cu ultraviolete folosește lumină ultravioletă) ca sursă de lumină, în timp ce al doilea folosește fascicul de electroni ca sursă de lumină. Atât microscoapele optice obișnuite, cât și microscoapele confocale laser aparțin microscoapelor optice.
Microscop optic obișnuit
Un microscop biologic comun este format din trei părți, și anume: ① sistem de iluminat, inclusiv sursa de lumină și condensator; ② Sistemul de amplificare optică, format dintr-un obiectiv și un ocular, este corpul principal al unui microscop. Pentru a elimina aberația sferică și cromatică, atât ocularul cât și obiectivul sunt compuse din grupuri complexe de lentile Dispozitiv mecanic, utilizat pentru fixarea materialelor și facilitarea observației.
Claritatea imaginii unui microscop nu depinde numai de mărirea acesteia, ci și de rezoluția acesteia. Rezoluția se referă la capacitatea unui microscop (sau a unui ochi uman la o distanță de 25 cm de țintă) de a distinge obiectele la intervale mici. Mărimea rezoluției depinde de lungimea de undă a luminii, indicele de deschidere și indicele de refracție al mediului. Se exprimă ca: R=0.61 λ/NANA=nsin /2, unde n=indicele de refracție al mediului; =unghiul de deschidere (unghiul la care specimenul deschide diafragma obiectivului), NA=apertura numerică. Colțul oglinzii este întotdeauna mai mic de 180?, Deci valoarea maximă a zui pentru sina/2 trebuie să fie mai mică de 1.
Indicele de refracție al sticlei utilizat la producerea lentilelor optice este 1,65-1,78 și cu cât indicele de refracție al mediului utilizat este mai apropiat de cel al sticlei, cu atât mai bine. Pentru obiectivele uscate, mediul este aerul, iar raportul de deschidere este în general 0.05-0,95; Lentila de ulei folosește ulei de cedru ca mediu, iar raportul de deschidere poate fi aproape de 1,5.
Lungimea de undă a luminii obișnuite este de {{0}}nm, deci valoarea rezoluției microscopului nu va fi mai mică de 0,2 μm, iar rezoluția ochiului uman este de 0,2 mm. Prin urmare, mărirea maximă pentru proiectarea microscopului este de obicei 1000X.
