Biomicroscopia cu privire la volumul blocurilor de țesut
Microscopia biologică Până în prezent, fixarea la rece, secțiunea ultra-subțire înghețată și uscarea prin congelare sunt metode de rutină pentru microsecțiile cu raze X de țesut și celule. Detaliile acestei metode sunt explicate după cum urmează:
Pentru microscoapele biologice cu condensator, condensatorul poate fi mutat în sus și în jos pentru a face luminozitatea moderată, iar deschiderea luminii variabile poate fi, de asemenea, modificată pentru a obține o luminozitate moderată de 9b. Dacă lumina este însorită, condensatorul poate fi ridicat în mod corespunzător, iar deschiderea sursei de lumină variabilă poate fi mărită în mod corespunzător. Dacă lumina este prea puternică, lentila condensatorului poate fi coborâtă în mod corespunzător, iar deschiderea luminii care se intersectează poate fi redusă în mod corespunzător. Dacă tot simțiți orbitor în acest caz, puteți alege un filtru adecvat și îl puteți așeza pe suportul de sub condensator. Acest stejar va putea obține luminozitatea care te mulțumește. Desigur, ajustarea pozițiilor superioare și inferioare ale condensatorului, ajustarea dimensiunii deschiderii citirii optice variabile și selectarea unui filtru adecvat necesită o anumită perioadă de practică pentru a câștiga experiență.
O problemă foarte importantă în microscopia biologică este aceea că în procesul de prelevare și separare a celulelor, după liofilizare și înglobare de rășină (FD), după congelarea agregatelor ultra-subțiri și după liofilizare, conținutul de 65 de elemente în fiecare parte trebuie manevrat cu grijă. Celulele care trebuie analizate nu pot fi deteriorate. Pentru că microanaliza cu raze X nu presupune doar mulți pași, ci costă și foarte mult. Dacă celulele analizate sunt celule deteriorate sau celule moarte după o lungă perioadă de timp și o prelucrare în mai multe etape, este foarte regretabil să tragem concluzii greșite. De exemplu, cardiomiocitele separate prin tratamentul cu colagenază au două forme, una este în formă de tijă lungă, iar cealaltă este rotundă. Acestea din urmă sunt celule pe moarte care sunt deteriorate în timpul izolării celulelor.
Biomicroscopie Cantitatea și distribuția electroliților în aceste două tipuri de celule sunt destul de diferite. Na este foarte mare și K este foarte scăzut în cardiomiocitele circulare, iar concentrația de ca în nematozi este foarte mare. După verificarea cu alte metode de analiză, se demonstrează că Na ridicat și K scăzut al celulelor rotunde și Ca mare din mitocondrii se datorează deteriorării membranei celulare în timpul procesului de separare a celulelor. Metoda de fixare la rece ca gheața a celulelor și țesuturilor este, de obicei, de a adopta mai întâi stingerea și fixarea, apoi depozitarea lor în azot lichid. Fixarea prin stingere este foarte importantă pentru efectul conservării. Celulele vii sau țesuturile proaspete sunt bogate în apă. La stingere, părțile celulelor sau țesuturilor care sunt în contact direct cu agentul frigorific zdrobit (mai ales la stingerea cu azot lichid) sunt adesea înghețate și fixate mai întâi, formând astfel o „cochilie”, care împiedică Părțile centrale ale celulelor au fost zdrobit și fixat la rece. Prin urmare, atunci când se face analiza micro-zonei X-line, se constată adesea că există cristale de gheață în centrul celulelor mai mari. Pentru a preveni acest lucru, se folosește ca agent frigorific spart o substanță cu un punct de topire mai mare decât cel al azotului lichid, dar mai mic decât cel al 806c. Există multe astfel de substanțe, dar cel mai ieftin este propanul concentrat (punctul de fierbere - 42.120c, punctul de topire - 187.10c, greutate moleculară 44.1), iar viteza de răcire este cea mai rapidă. Dar dezavantajul său este că este inflamabil.
Microscopul biologic poate pune fibra musculară pe un suport special, astfel încât atunci când contracția fibrei musculare atinge o anumită fază și trebuie să fie fixată, porniți imediat duza pentru a pulveriza propan lichid pe fibra musculară pentru a o stinge și a o repara. Apoi fibrele musculare împreună cu cadrul au fost scoase și puse în azot lichid. Dacă fixați celule sanguine sau celule izolate, mai întâi concentrați celulele prin centrifugare la viteză mică, transferați celulele într-un flacon de argint cu conductivitate termică bună, puneți flaconul în propan lichid și congelați pentru fixare. La fixarea pancreasului de șobolan în laboratorul Hall, cele două blocuri de oțel au fost prerăcite cu heliu lichid (sau azot lichid), iar cele două blocuri de cupru au fost prinse cu pense și așezate pe partea din față și din spate a pancreasului pentru a stinge și fixa. pancreasul. Țesuturile sau celulele pot fi depozitate în azot lichid pentru depozitare pe termen lung după stingere și fixare.
Microscopie biologică Pe lângă cea mai respectată metodă de secțiune ultrasubțire congelată, iată o altă tehnică de depunere folosită de oamenii de știință. Se adaugă o substanță pentru a forma un sediment cu componenta de analizat pentru a o imobiliza înainte de analiză, iar sedimentul este apoi analizat. De exemplu, oamenii folosesc adesea oxalat și piroantimonat pentru a depune ca în celulele musculare. Primul nu este suficient de sensibil la concentrația scăzută de Ca din citoplasmă; piroantimonatul este mai sensibil și poate forma depozite electro-dense cu Ca liber în creier, dar piroantimonatul nu este compatibil cu sodiu, mangan, bariu, fier Se formează și depozite și sunt mai puțin specifice. Procesul de pregătire a specimenului este similar cu prepararea specimenelor cu secțiune ultrasubțire la microscopul electronic cu transmisie obișnuită, diferența este că 3% piroantimonat de potasiu (soluție salină tampon fosfat, pH 7,6) a fost fixat timp de 6 ore înainte de fixare, iar pe secțiunile ultrasubțiri ale mușchilor colorate, S-au observat depozite negre în liniile mediane ale benzilor A și 2 ale fiecărui sarcomer, iar secțiunile necolorate au fost utilizate pentru microanaliza cu raze X. Tetraclorhidratul de diaminobenzidină (DAB) a fost folosit pentru a precipita substanțele care conțin hem și așa mai departe. Combinația dintre reacția de precipitare histochimică și puntea de microdiferențiere cu raze X poate fi luată în considerare în laboratoarele care nu au condiții de secțiune ultrasubțire înghețată. Semicantitativ se poate face în funcție de înălțimea vârfului elementelor de analizat
