Avantajele îmbunătățirilor la microscoapele multifotonice cu scanare laser
Microscopul multifotonic cu scanare laser este o îmbunătățire semnificativă a microscopiei optice, care se manifestă în principal prin capacitatea de a observa structurile profunde ale celulelor vii, celulelor fixe și țesuturilor și de a obține structuri plane Z-strat multiple clare și clare, și anume felii optice, care pot fi folosite pentru a construi structuri solide de specimene tridimensionale. Microscopul confocal folosește o sursă de lumină laser, care este extinsă pentru a umple întregul plan focal al lentilei obiectivului și apoi converge în puncte foarte mici pe planul focal al specimenului prin sistemul de lentile al lentilei obiectiv. În funcție de deschiderea numerică a obiectivului, diametrul punctului de iluminare strălucitoare este de aproximativ 0,25-0,8 μm, iar adâncimea este de aproximativ 0,5-1,5 μm. Mărimea punctului confocal este determinată de designul microscopului, lungimea de undă laser, caracteristicile obiectivului, setările stării unității de scanare și proprietățile specimenului. Intervalul de iluminare și adâncimea unui microscop de câmp sunt mari, în timp ce iluminarea unui microscop confocal este focalizată pe un punct focal din planul focal. Avantajul de bază al microscopiei confocale este că poate efectua secționări optice fine pe specimene fluorescente groase (până la 50 μ m sau mai mult), cu o grosime de aproximativ 0,5 până la 1,5 μ m. Seria de imagini optice secțiuni poate fi obținută prin deplasarea specimenului în sus și în jos folosind motorul pas cu axa Z-al microscopului. Colectarea de informații despre imagine este controlată în planul * *, fără interferențe de la semnalele emise din alte poziții de pe specimen. După eliminarea influenței fluorescenței de fundal și creșterea raportului semnal-zgomot, contrastul și rezoluția imaginilor confocale sunt îmbunătățite semnificativ în comparație cu imaginile tradiționale cu fluorescență cu iluminare de câmp. În multe exemplare, componente structurale complexe se întrepătrund pentru a forma sisteme complexe, dar odată ce se pot colecta suficiente secțiuni optice, putem folosi software pentru a le reconstrui în trei dimensiuni. Această metodă experimentală a fost utilizată pe scară largă în cercetarea biologică pentru a elucida relațiile complexe structurale și funcționale dintre celule sau țesuturi.
